Pokračování epické ságy podle nového komiksového románu Franka Millera Xerxes, vyprávěného úchvatným vizuálním stylem úspěšné série 300, se přesouvá na nové bojiště – na moře, kde řecký generál Themistokles, usilující o sjednocení celého Řecka, vede bitvu, která zvrátí dosavadní vývoj války. Ve filmu 300: Vzestup říše čelí Themistokles masivní invazi perské armády vedené božským Xerxesem a Artemesií, pomstychtivou velitelkou perského loďstva.

V roce 480 před n. l. ambiciózní, krutý a nemilosrdný perský král Xerxes (David Farrar) napadl Řecko se svou obrovskou armádou aby rozšířil své impérium. Hrdinská spartánská armáda je velkou nadějí pro svobodné a jednotné Řecko a král Leonidas (Richard Egan) slíbí shromáždění řeckých států, že zastane Termopylskú soutěsku, jedinou cestu po souši, kterou se dá dostat do Atén. No je zrazen sparťanský politiky a zůstane sám se svou osobní armádou 300 bojovníků. Jelikož Leonidas je skvělý voják a stratég, ubrání Thermopyl dokud podvratný pasák koz nevyzradí králi Xerxes tajný chodník vedoucí do týla Leonidasovej armády.

Roku 1193 před Kristem unesl Trojský princ Paris (Orlando Bloom) ženu Spartského krále Menelaose, krásnou Helenu (Diane Kruger). Králův hněv vyústil v desetiletou válku mezi nejsilnějším z řeckých měst a Trojany. Střetli se v ní největší antičtí hrdinové Sparty v čele s Achilesem (Brad Pitt) a Troji, vedení Hectorem (Eric Bana), nejstarším synem krále Priama. Její vyústění patří k největším příběhům všech dob.

Roku 480 př. Kr. perský král Xerxes vedl svou armádu, aby konečně rozdrtila Řecko. Nejvhodnějším obranným postavením byl pro Řeky průsmyk u Thermopyl, jenž k obraně poskytoval prostor velký méně než 4,5 metru. Právě tam se 300 sparťanských vojáků, vedených králem Leonidasem utkalo s obrovskou přesilou… „Bež, poutníče, a zvěstuj Sparťanům, že mrtvi tady ležíme, tak jak zákony kázaly nám.“ – věnování na pomníku padlým v Thermopylské soutěsce.